Radioimmunochemiczne oznaczanie ilości ludzkiej deaminazy adenozyny.

Znacznie zmniejszona lub nieobecna aktywność deaminazy adenozyny u człowieka jest związana z autosomalną, recesywną postacią ciężkiej choroby złożonego niedoboru odporności. Aby dokładniej zdefiniować genetyczną naturę tego defektu enzymu, dokonaliśmy ilościowej analizy immunologicznie aktywnej deaminazy adenozyny (CRM) w hemolizacie pacjentów z niedoborem homozygotycznym i ich heterozygotycznych rodziców. Opracowano wysoce specyficzny test radioimmunologiczny umożliwiający wykrycie 0,05% normalnej deaminazy adenozyny erytrocytów. Hemolizaty z dziewięciu heterozygot (pięć rodzin) wykazywały szeroki zakres CRM (32-100% normalnej) i zmienne bezwzględne aktywności specyficzne z kilkoma co najmniej SD PONIŻEJ NORMALNEJ MEAN. Hemolizaty od czterech niespokrewnionych pacjentów wykazywały mniej niż 0,09% aktywności deaminazowej adenozyny przy CRM w zakresie od mniej niż 0,06 do 5,6% normalnej średniej. Continue reading „Radioimmunochemiczne oznaczanie ilości ludzkiej deaminazy adenozyny.”

Octan mirystynianu pothoru stymuluje zależny od ATP transport wapnia przez błonę komórkową neutrofili.

Badaliśmy wpływ octanu mirystynianu forbolu (PMA) na zależną od ATP zależną od ATP pompę wapniową w neutrofilach. Frakcje wzbogacone w błony komórkowe ( podosomy ) ze stymulowanych PMA neutrofili świnki morskiej wykazywały podwójną stymulację zależnego od ATP transportu wapnia w porównaniu z podosomami kontrolnymi. Efekt stymulacyjny był szybki (początek mniej niż 2 min po ekspozycji na PMA) i osiągnął maksymalne wartości w ciągu 5 minut. PMA zwiększył maksymalną prędkość, ale nie powinowactwo pompy wapniowej do Ca ++. Aktywacja pompy nie była poprzedzona wzrostem stężenia wolnego wapnia w cytozolach [Ca ++] i, co oceniono za pomocą wewnątrzkomórkowo uwięzionego fluorescencyjnego wskaźnika wapnia Quin 2, ale zamiast tego nieznacznie obniżono [Ca ++] i zapobiegając wzrostowi [Ca ++] i normalnie indukowanemu przez peptyd chemotaktyczny formyl-metionyl-leucylo-fenyloalanina. Continue reading „Octan mirystynianu pothoru stymuluje zależny od ATP transport wapnia przez błonę komórkową neutrofili.”

Regulacja in vivo sekrecji oskrzelowych komórek Clara u szczurów.

Zastosowaliśmy ultrastrukturalne metody morfometryczne do badania regulacji wydzielania in vivo przez komórki Clary szczurów z bronchiolami. Badane komórki Clara znajdowały się w drogach oddechowych o wewnętrznej średnicy 0,21 +/- 0,06 mm (średnia . SD) przy ciśnieniu transpulnownym 20 cm H2O. Stwierdziliśmy, że pilokarpina powodowała 50% spadek gęstości objętościowej wydzielniczych granulek komórek Clara w 60 minut i że atropina blokowała ten efekt. Izoproterenol spowodował podobny spadek gęstości objętościowej, który został zablokowany przez propranolol. Continue reading „Regulacja in vivo sekrecji oskrzelowych komórek Clara u szczurów.”

Działanie embriotoksyczne krótkotrwałej hipoglikemii insuliny u matki podczas organogenezy u szczurów.

Aby sprawdzić, czy hipoglikemia u matki może upośledzać organogenezę, wywołaliśmy krótką glukopopenię za pomocą insuliny u przytomnych ciężarnych szczurów podczas fazy headfold lub etapu wczesnego zamknięcia cewy nerwowej w embriogenezie. Za każdym razem 10 par zwierząt otrzymywało identyczne infuzje insuliny przez godzinę. Połowę zwierząt utrzymywano w euglikemii podczas infuzji, podczas gdy pozostali mieli możliwość hipoglikemii. Utrzymywanie lub przywracanie euglikemii u wszystkich zwierząt natychmiast po ustaniu insuliny. Spontaniczna aktywność została zmniejszona podczas hipoglikemii, ale świadomość została zachowana. Continue reading „Działanie embriotoksyczne krótkotrwałej hipoglikemii insuliny u matki podczas organogenezy u szczurów.”

Wzmocnienie jednojądrowej aktywności prokoagulacyjnej przez kwas 12-hydroksyeikosatetraenowy płytek krwi.

Płytki krwi indukują wytwarzanie aktywności czynnika prokoagulacyjnego (TFa) przez jednojądrzaste leukocyty, a także wzmacniają TFa indukowane przez endotoksynę. Nasze obecne badanie wykazało, że kwas arachidonowy, który sam w sobie nie miał wpływu na jednojądrzaste TFa, znacznie poprawił TFa wywołany płytkami krwi. Efekt był zależny od stężenia zarówno dla płytek jak i arachidonianu (1-20 mikroM); inne testowane kwasy tłuszczowe były nieaktywne. Nasilające działanie arachidonianu było bardziej wyraźne, jeśli płytki wystawiono na działanie aspiryny, co sugeruje zaangażowanie lipooksygenazy. Wytwarzanie kwasu 12-hydroksyeikosatetraenowego (12-HETE) wykazano biochemicznie w preparatach z płytek krwi / arachidonianu / jednojądrzastych traktowanych aspiryną, które wytworzyły wysokie poziomy TFa. Continue reading „Wzmocnienie jednojądrowej aktywności prokoagulacyjnej przez kwas 12-hydroksyeikosatetraenowy płytek krwi.”

Przedsionkowy czynnik natriuretyczny zmniejsza zawartość cyklicznego monofosforanu adenozyny w ludzkich fibroblastach poprzez zwiększenie aktywności fosfodiesterazy.

W badaniach wiązania radioliganda ujawniono receptory czynnika krzepnięcia przedsionkowego o wysokim powinowactwie (ANF) na ludzkich błonach fibroblastów (Kd = 66 pM, maksymalna liczba miejsc wiązania [Bmax] = 7 000 miejsc / komórkę). ANF zwiększał zawartość cyklofosforynowej cyklonowej guanozyny (cGMP) i tłumił zawartość cAMP w izoproterenolu i podwyższonym PGE1, ale nie na poziomie podstawowym. Wstępne leczenie toksyny krztuśca, w której maksymalnie glikozylacja ADP-rybozylowana, białko wiążące nukleotyd z guaniną, które łączy inhibitory receptorów z cyklazą adenylanową i blokuje hamowanie cyklazy adenylanowej za pośrednictwem receptorów, nie przeszkadza w hamowaniu ANF przez komórkową zawartość cAMP podwyższoną przez izoproterenol lub PGE1. . Wstępna inkubacja fibroblastów z 8-bromo-cGMP lub inhibitorami fosfodiesterazy, w tym 3-izobutylo-1-metyloksantyną, Ro 20-1724 i cilostamidem, jednak zapobiegała ANF zahamowaniu cAMP. Continue reading „Przedsionkowy czynnik natriuretyczny zmniejsza zawartość cyklicznego monofosforanu adenozyny w ludzkich fibroblastach poprzez zwiększenie aktywności fosfodiesterazy.”

Kontrola aktywności sucrazowej jelita czczego i maltazy przez dietetyczną sacharozę fruktozy u człowieka: model badania regulacji enzymów u człowieka

Zbadano specyficzny wpływ cukrów dietetycznych na aktywność disacharydazy jelita czczego u siedmiu normalnych, niezatężonych ochotników płci męskiej. Badanymi cukrami były sacharoza, maltoza, laktoza, glukoza, fruktoza i galaktoza. Dokonano porównania wpływu każdego cukru na izowaloryczną dietę płynną. U wszystkich osób karmienie sacharozą, w porównaniu do karmienia glukozą, znacznie zwiększyło aktywność sutka jelita czczego (S) i maltazę (M), ale nie aktywność laktazy (L). Wskaźniki S / L i M / L wzrosły w znacznym stopniu. Continue reading „Kontrola aktywności sucrazowej jelita czczego i maltazy przez dietetyczną sacharozę fruktozy u człowieka: model badania regulacji enzymów u człowieka”

Biosynteza leukotrienów przez leukocyty polimorfojądrowe od dwóch pacjentów z przewlekłą chorobą ziarniniakową.

Polimorfonuklearne leukocyty (PMNL) wyizolowane od dwóch pacjentów z przewlekłą chorobą ziarniniakową (CGD) badano pod kątem ich zdolności do metabolizowania kwasu arachidonowego do produktów lipooksygenazy, w tym 5 (S), 12 (R) -dihydroksy-6,14-cis-8,10 kwas trans-eikozatetraenowy (LTB4). Analizy inkubacji tych PMNL z kwasem arachidonowym i jonoforem wapnia A23187 nie różniły się od jednoczesnych kontroli wytwarzania LTB4, innych kwasów 5,12-dihydroksy-eikozatetraenowych lub kwasów monohydroksy-eikozatetraenowych. Rozpoznanie kliniczne CGD potwierdzono w obu przypadkach przez oznaczenie chemiluminescencji PMNL. Leukocyty od obu pacjentów nie wytwarzały aktywnych gatunków tlenu w odpowiedzi na LTB4 lub formyl-metionyl-leucylo-fenyloalaninę. Obserwacja utleniania kwasu arachidonowego pod nieobecność anionu ponadtlenkowego wyklucza rolę aktywnych gatunków tlenu w tym procesie metabolicznym. Continue reading „Biosynteza leukotrienów przez leukocyty polimorfojądrowe od dwóch pacjentów z przewlekłą chorobą ziarniniakową.”

Zależne od wieku uszkodzenie kłębuszków nerkowych u szczurów. Dysocjacja między uszkodzeniem kłębuszkowym a nadciśnieniem kłębuszkowym i przerostem. Płci męskiej jako główny czynnik ryzyka.

Kłębuszek rozwija postępujące uszkodzenie z wiekiem, co jest szczególnie wyraźne u mężczyzn i nie jest wynikiem żadnego konkretnego procesu chorobowego. W niniejszych badaniach przeprowadzonych na szczurach, funkcję kłębuszkową i strukturę badano u dorosłych szczurów Wistar dorosłych (8 miesięcy), starszych (12 miesięcy) i starych (19 miesięcy). Nienaruszone samce i samice oraz kastrowane szczury obu płci badano w celu określenia roli hormonów płciowych w pośredniczeniu zależnego od wieku uszkodzenia kłębuszków nerkowych. Nienaruszone samce rozwinęły uszkodzenie kłębuszków nerkowych i białkomocz, podczas gdy samice, zarówno nienaruszone, jak i wycięte jajniki, i wykastrowane samce były chronione przed uszkodzeniem. Krzepkowe ciśnienie krwi nie wzrastało wraz z wiekiem w żadnej grupie i nie korelowało z uszkodzeniem kłębuszków nerkowych. Continue reading „Zależne od wieku uszkodzenie kłębuszków nerkowych u szczurów. Dysocjacja między uszkodzeniem kłębuszkowym a nadciśnieniem kłębuszkowym i przerostem. Płci męskiej jako główny czynnik ryzyka.”