Ekspresja i funkcjonalne znaczenie alternatywnej splicingowej fibronektyny CS1 w reumatoidalnym zapaleniu stawów.

Ekspresję izoform fibronektyny (FN) zawierającą CS1, 25-aminokwasową sekwencję obecną w alternatywnie splicowanym regionie IIICS FN, analizowano w maziówce reumatoidalnego zapalenia stawów (RA). Nieoczekiwanie, warianty FN zawierające CS1 znaleziono wyłącznie na śródbłonku, ale nie w macierzy pozakomórkowej (ECM) maziówki RA. Lumenalna ekspresja CS1 na komórkach śródbłonka RA, obserwowana przez mikroskopię elektronową, korelowała ze stanem zapalnym w RA, ponieważ normalna błona maziowa wykazywała niewielką ekspresję CS1 bez zauważalnego spadku FN ECM. Ekspresję CS1 na ludzkich komórkach śródbłonka dodatkowo wykazano za pomocą analiz mRNA FN. W testach adhezji na zamrożonych odcinkach maziówkowych RA, komórki limfoblastoidalne T wyrażające funkcjonalnie aktywowaną integrynę alfa4 beta specyficznie przyłączoną do wewnątrznaczyniowej powierzchni śródbłonka RA. Continue reading „Ekspresja i funkcjonalne znaczenie alternatywnej splicingowej fibronektyny CS1 w reumatoidalnym zapaleniu stawów.”

Badania nad patogenezą typowej nerkowej kanalikowo-nerkowej typu I, ujawnioną w wyniku napięć Pco2 w moczu

Badanie to zostało zaprojektowane w celu zbadania patogenezy typu I (dystalnej) kwasicy kanalikowej nerki. Naprężenia Pco2 w moczu i krwi określano, gdy pH moczu było równe lub przekraczało odpowiednie pH krwi. Dało to wskazówkę o wydzielaniu netto jonów wodoru w dystalnym nerkorze. U 16 osób zdrowych wartość Pco2 w moczu przekroczyła wartości krwi (UB Pco2) o 32,7 . 3,1 mm Hg. Continue reading „Badania nad patogenezą typowej nerkowej kanalikowo-nerkowej typu I, ujawnioną w wyniku napięć Pco2 w moczu”

Zmniejszenie aktywności syntetazy uroporfirydynowej I w komórkach I w przerywanej ostrej porfirii

Intermittent ostrą porfirię ostatnio wyodrębniono biochemicznie z innych genetycznych porfirii wątrobowych poprzez obserwację zmniejszonej aktywności syntetazy wątrobowej uroporfirynogenu I i zwiększoną aktywność syntetazy kwasu . -aminolewulinowego. Ponieważ niedobór syntetazy uroporfirynogenu I może znaleźć odzwierciedlenie w tkankach nie wątrobowych, przetestowaliśmy ten enzym w hemolizatach czerwonych krwinek od osób nieperfirycznych i od pacjentów z genetyczną porfirią wątrobową. Jedynie pacjenci z przerywaną ostrą porfirią zmniejszyli aktywność syntetazy uroporfirynogenu erytrocytów, która wynosiła około 50% normy. Pozorna Km częściowo oczyszczonej syntetazy uroporfirynogenu I wynosiła 6 × 10 <6 m zarówno w przypadku substancji nieopijowych, jak i pacjentów z przerywaną ostrą porfirią. Continue reading „Zmniejszenie aktywności syntetazy uroporfirydynowej I w komórkach I w przerywanej ostrej porfirii”

Uwolnienie czynników mitogennych przez hodowane preadipocyty od masywnie otyłych ludzi.

W tym badaniu poszukiwano możliwych czynników parakrynnych w tkance tłuszczowej osób szczupłych i otyłych. Kondycjonowane pożywki przygotowano przez inkubację w minimalnym minimalnym medium alfa prekursorów adipocytów pochodzących od szczupłych i masywnie otyłych osobników. Kondycjonowane pożywki pochodzące od prekursora adipocytów z otyłości stymulowały replikację hodowanych szczurzych prekursorów peryferyjnych szczurów około czterokrotnie ponad kontrolę. Wpływ mediów uwarunkowanych przez prekursory pochodzące od osób szczupłych był znacznie mniej widoczny. Mitogenność kondycjonowanych pożywek została zniesiona przez trypsynę, co wskazuje na białkowy charakter czynnika (-ów) mitogennego (-ych). Continue reading „Uwolnienie czynników mitogennych przez hodowane preadipocyty od masywnie otyłych ludzi.”

Staphylococcus aureus Cowan I. Silny bodziec do produkcji reumatoidalnego czynnika immunoglobulinowego.

Badania te wykazują, że Staphylococcus aureus Cowan I (SAC), szczep A-dodatni gronkowca A-dodatniego, jest silnym i stałym induktorem wytwarzania reumatoidalnego czynnika IgM przez prawidłowe ludzkie jednojądrzaste komórki krwi obwodowej. Częstotliwość i wielkość tej odpowiedzi znacznie przewyższała częstotliwość równoległych kultur stymulowanych mitogenem szkarłatków lub białkowym szczepem S. aureus A-ujemnym A, chociaż wszystkie trzy czynniki indukowały podobną ilość całkowitej IgM. Badania frakcjonowania komórek wykazały, że indukowany SAC czynnik reumatoidalny IgM jest zależny od limfocytów T. Uderzająca zdolność SAC do indukowania reumatoidalnego czynnika IgM może odnosić się do jego zawartości białka A, ponieważ hodowle stymulowane za pomocą kulek sefarozowych sprzężonych z białkiem A także konsekwentnie wytwarzały to autoprzeciwciało. Continue reading „Staphylococcus aureus Cowan I. Silny bodziec do produkcji reumatoidalnego czynnika immunoglobulinowego.”

Nowy ekson w genie transbłonowego promotora konduktazy mukowiscydycznej aktywowanego przez mutację nonsensowną E92X w komórkach nabłonka dróg oddechowych pacjentów z mukowiscydozą.

Mukowiscydoza (CF) jest spowodowana przez mutacje w genie transbłonowego promotora przewodnictwa mukowiscydozy (CFTR). Opowiadamy o nowatorskiej mutacji nonsensownej, która prowadzi do pominięcia eksonu i aktywacji enkrypcyjnego egzonu. Przeszukiwanie genomowego DNA od 700 niemieckich pacjentów z CF odkryło cztery przypadki z mutacją nonsensowną E92X, transwersją G -> T, która tworzy kodon terminacyjny i wpływa na pierwszą zasadę eksonu 4 genu CFTR. Stwierdzono, że RNA limfocytów u dwóch pacjentów z CF, heterozygotycznych pod względem E92X, zawiera sekwencję typu dzikiego i izoformę z inaczej zróżnicowanym splicingiem pozbawionym egzonu 4. W RNA pochodzącym z komórek nabłonka nosa pacjentów z E92X zaobserwowano trzeci fragment o dłuższym rozmiarze. Continue reading „Nowy ekson w genie transbłonowego promotora konduktazy mukowiscydycznej aktywowanego przez mutację nonsensowną E92X w komórkach nabłonka dróg oddechowych pacjentów z mukowiscydozą.”

Fibryna indukuje uwalnianie czynnika von Willebranda z komórek śródbłonka.

Dodanie fibrynogenu do ludzkich komórek śródbłonka żyły pępkowej w hodowli spowodowało uwolnienie czynnika von Willebranda (vWf) z ciał Weibel-Palade, które były czasowo związane z tworzeniem się fibryny w pożywce. O ile nie nastąpiło uwolnienie przed żelowaniem, tworzenie fibryny wiązało się ze zniknięciem ciał Weibel-Palade i rozwojem zewnątrzkomórkowych plam immunofluorescencji typowych dla uwalniania vWf. Uwalnianie nastąpiło również w ciągu 10 minut od ekspozycji na wcześniej wytworzoną fibrynę, ale nie pojawiło się po ekspozycji na przemyte krwinki czerwone, płynny skrzep lub strukturalnie różną fibrynę przygotowaną z użyciem reptilazy. Metabolicznie znakowany vWf został oczyszczony z pożywki po uwolnieniu przez fibrynę i wykazał, że składa się z wysoko przetworzonego białka pozbawionego podjednostek pro-vWf. Udział resztkowej trombiny w uwalnianiu stymulowanej przez fibrynę zminimalizowano przez przygotowanie skrzepów fibryny z nie stymulującym stężeniem trombiny i przez hamowanie pozostałości trombiny za pomocą hirudyny lub ogrzewanie. Continue reading „Fibryna indukuje uwalnianie czynnika von Willebranda z komórek śródbłonka.”

Wpływ kortykosteroidów in vitro na aktywację, proliferację i różnicowanie komórek B.

Niniejsze badanie pokazuje stopniowy wpływ kortykosteroidów in vitro (CSs) na różne fazy aktywacji, proliferacji i różnicowania komórek B. Wczesne zdarzenia, takie jak aktywacja i proliferacja komórek B o wysokiej dawce anty-mu lub stymulowanych przez Staphylococcus aureus, są głęboko tłumione przez obecność CS in vitro. W hamowanej odpowiedzi proliferacyjnej może pośredniczyć bezpośredni wpływ na komórki B i / lub modulacja funkcji komórek pomocniczych. Późniejsze zdarzenia w cyklu komórek B, takie jak odpowiedź proliferacyjna na czynnik wzrostu komórek B po aktywacji in vivo lub in vitro, są mniej wrażliwe na działanie hamujące CS in vitro. Ostatnie wydarzenia w cyklu komórek B; mianowicie, zróżnicowanie do stanu wytwarzania immunoglobuliny, nie jest tłumione przez CS in vitro. Continue reading „Wpływ kortykosteroidów in vitro na aktywację, proliferację i różnicowanie komórek B.”